大艺帝国

2008-06-15

生化实验室（11）——糖酵解中间产物的鉴定

实验的原理：利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比。

产生糖酵解，当然需要生物了，我们用了酵母。

三支试管，1号管：加入了三氯醋酸，破坏了全部的酶，所以不可进行糖酵解；2号管，放进碘乙酸，对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的起抑制作用，3号管，什么都不加。放进37℃中，然后就可以看到，3号管发酵得最爽。泡泡是CO₂ 。

然后为了验证 “3-磷酸甘油醛不再向前变化而积累”，所以我们再对2、3号管进行处理。步骤不说了，看最后的结果，说明了2号管的3-磷酸甘油醛最多，也就是证明了碘乙酸的抑制剂作用。

做这些实验不是为了实验，而是为了学到东西；通过这个实验，我们得到了两个很爽的想法：

1.碘乙酸的抑制剂作用；

2.原来在糖酵解的分解循环中，中间产物有3-磷酸甘油醛；

这对于我们学习与研究糖酵解很有益处！

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2008-06-12

生化实验室（10）——酶活力的测定

（图一）

有一个很有趣的例子：你要到山的另一边，你选择的是爬到山顶再过去还是走山底隧道呢？（不要说是愚公移山这么一劳永逸的想法，我个人还是觉得愚公他老人家尝试挖隧道要比移山要好。）

明显地，选山底隧道在很多时候是个最佳方案。这和酶的思维其实一样，降低化学反应的活化能。

故今天我们就来测定一下它的活力了。众所周知，酶的活力与温度、PH、气压等外界条件有密切的关系，可这些今天都排除在外。

做实验的材料是发芽的小麦，测定的是里面的淀粉酶。为什么要选择发芽的？这很容易解释：种子生长，新陈代谢加强，酶就多了。

然后有两点知识点：

1）淀粉酶可以把淀粉水解为麦芽糖；

2）水杨酸和麦芽糖反应，生成颜色与浓度成正比的橙黄色化合物，可以用分光法作出标准曲线，然后计算出酶的活力；

过程我就不写了，网上有很多。

*注：（ 图一 来源于网络）

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2008-05-28

生化实验室（9）——酮体的生成与测定

肝脏是我们身体中新陈代谢的重要器官，也是一座化工厂!

脂肪酸在肝脏中氧化分解所生成的乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种中间代谢产物，统称为酮体。

酮体生成及利用的生理意义：
(1)在正常情况下，酮体是肝脏输出能源的一种形式：由于酮体的分子较小，故被肝外组织氧化利用，成为肝脏向肝外组织输出能源的一种形式。
(2)在饥饿或疾病情况下，为心、脑等重要器官提供必要的能源：在长期饥饿或某些疾病情况下，由于葡萄糖供应不足，心、脑等器官也可转变来利用酮体氧化分解供能。

“社会一旦有技术上的需要，则这种需要就会比十所大学更能把科学推向前进。”——恩格斯

我觉得科学的目的应该在于知道它有什么用。所以这个实验就可以让我们去测定液体中的酮体的含量，你问我测定酮体有什么实际用途：

在饥饿、高脂低糖膳食及糖尿病时，脂肪动员加强，脂肪酸氧化增多，酮体生成过多，超过肝外组织利用酮体的能力，引起血中酮体升高，当高过肾回收能力时，则尿中出现酮体，即为酮症(ketosis)。因酮体中乙酰乙酸及β-羟丁酸都是相对强的有机酸，如在体内堆积过多可引起代谢性酸中毒

这对于糖尿病患者是一个有用的测定，会在医院中用到。

———————我是一条可爱的分隔线———————–

我们实验用的是碘仿反应测定；两支滴定管，一个是滴定锥形瓶中的碘含量，一个是滴定反应后碘的含量（因为酮体可与碘生成碘仿），然后一相减，便可计算出酮体的量。（滴定管中的是硫代硫酸钠溶液。）

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2008-05-26

微生物实验室（9）——芽孢染色法

今天的实验是最后一个微生物实验了，时间过得真快，与细菌的感情才刚刚开始的样子……也就是说这个微生物实验室的小专题没有什么特殊的情况出现的话，就会结束的了。

先回顾上一次的实验：

葡萄糖的一支从蓝色变为黄色，证明了菌种糖酵解后使其环境变为酸性

不同的菌对糖、醇的分解能力不同，有些会产生气泡，有些则否。实验的目的在于利用糖的利用能力来作为鉴定菌种的依据之一。

———————-我是可爱的分割线————————–

实验原理：芽孢难以染色和脱色，利用这一原理，我们就通过加入强染色液与加热来对芽孢进行染色，再把菌体脱色，染上对比强的颜色，在显微镜下观察；

芽孢的结构（来之于百度图片）

枯草芽孢杆菌显微图（10*100，油镜）

苏云芽孢杆菌显微图（16*100，油镜）

苏云芽孢杆菌显微图（16*100，油镜）  ，是上图的局部 。

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微生物实验室结束了，谢谢大家的支持！

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2008-05-21

生化实验室（8）——过氧化氢酶（POD）活性的测定

实验目的：植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明，植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产生。过剩自由基的毒害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。

——《生物化学总汇》

愈创木酚与POD反应后，生成褐色物质，并在一定范围内成正比例增加吸光值。

本次实验用的试剂

离心后，上清液为POD的粗提取液

最后用分光光度计测定它酶解的速度

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